После окончания колледжа переехала в Нью-Йорк, где устроилась маркетологом в компанию «Chanel». Однако вскоре Стефани поняла, что выбрала не ту профессию, и начала посещать актерские курсы.
Дебютировала в кино в 2003 году в картине Джейсона Хернандеса-Розенблатта «Si' Laraby». В 2004 году сыграла в короткометражке Софи Бартез и Андрия Пареха «Украинская свадьба». Затем ее фильмография пополнилась работами в таких лентах, как «Something Fun» («Кое-что веселое») и «A New York Thing». В 2005 году на экраны вышла независимая картина Джеффа Виннера «Satellite» («Спутник»), в котором Стефани Зостак исполнила главную роль. В 2005 году Стефани признали лучшей актрисой на «Bend Film Festival» за роль в фильме «Спутник».
В 2006 году актриса исполнила роль Жаклин Фоллет в картине Дэвида Фрэнкела «The Devil Wears Prada» («Дьявол носит «Prada»). Лента собрала в мировом прокате $326 260 148 при бюджете в $35 000 000. В том же году Стефани Зостак приняла участие в шестом сезоне популярного криминального телесериала канала «HBO» – «The Sopranos» («Клан Сопрано»). В 2007 году на видео вышла драма Фионы МакКензи «She Likes Girls» («Она любит девушек») со Стефани Зостак и Алекси Гилмор в ролях. Спустя год артистка отметилась участием в драме Трэйси Хехт «Life in Flight» («Жизнь это полет»), ленте Мэттью Миле «Eavesdrop» («Капель») и криминальном сериале «Law & Order: Criminal Intent» («Закон и порядок. Преступное намерение»).
В 2009 году актриса сыграла сразу в шести полнометражных картинах: «Four Single Fathers» («Четыре отца-одиночки»), «Motherhood» («Материнство»), «Rebound» («Нянька по вызову»), «Good Heart» («Доброе сердце»), «Une aventure New-Yorkaise» («Приключение жительницы Нью-Йорка») и «How to Seduce Difficult Women» («Как соблазнять труднодоступных женщин»). В 2010 году на экраны вышла комедия с участием Стива Карелла, Зака Галифианакиса, Пола Радда и Стефани Зостак под названием «Dinner for Schmucks» («Ужин с придурками»).
