С малых лет Дмитрий увлекался бальными танцами. Окончив общеобразовательную школу, он решил поступать в Санкт-Петербургский государственный аграрный университет в Пушкине. В это время Дмитрий стал участником команды «КВН». Спустя некоторое время он решил с аграрного факультета перейти на экономический в Государственном университете аэрокосмического приборостроения.
С 1998 года Дмитрий Хрусталёв играл в команде «КВН» «Сборная Санкт-Петербурга» и был её капитаном. В 1998 году команда завоевала Кубок Москвы, в 1999 году вошла в финал Высшей Лиги. В 2000 году ей присудили кубок «Малого КиВиНа». В 2002 году команда Хрусталёва стала вице-чемпионом Высшей Лиги. На следующий год «Сборной Санкт-Петербурга» вручили Летний кубок КВН. Дмитрий Хрусталёв получил широкую известность в основном благодаря пародиям на Владимира Путина.
После того как Дмитрий Хрусталёв и его команда окончили играть в «КВН», он некоторое время перестал появляться на экранах телевизоров. В это время он стал играть в спектаклях. В частности, Дмитрий Сарвин и Илья Мощницкий пригласили Хрусталёва поучаствовать в спектакле «Интервью с вампиром». Спектакль был поставлен на сцене Мюзик-Холла в Санкт-Петербурге. В 2005 году Дмитрий начал играть в комедии «Любовь втроём». Здесь коллегами актёра стали Виктор Васильев и Полина Сибагатуллина. На протяжении трёх лет «Любовь втроём» пользовалась большим успехом.
На экраны телевизоров Хрусталёв вернулся вновь в 2007 году. С этого времени он стал выступать в дуэте с Виктором Васильевым в программе «Comedy Club». Через год Дмитрий начал сниматься в «Comedy Woman».
В 2013 году Дмитрию Хрусталёву предложили стать соведущим в программе «Вечерний Ургант» вместе с Иваном Ургантом. Программа выходила в эфир на Первом канале. В 2014 году Хрусталёв начал вести шоу «Ленинградский Stand-up клуб», которое можно было увидеть на канале «СТС». В этом же году вместе с Виктором Васильевым он стал принимать участие в съёмках «Театра эстрады», а в 2015 был членом жюри в программе «Танцуй».
Дебют в большом кино состоялся в 2004 году. Дмитрию Хрусталёву предложили исполнить небольшую эпизодическую роль в фильме «Разрешите пройти». Далее последовала работа в сериале «Мечты Алисы», который вышел на ТВ. Здесь актёру довелось сыграть роль азартного КВНщика.
В 2009 году в прокат вышел фильм с участием Дмитрия Хрусталёва «Самый лучший фильм 2». Здесь актёр исполнил одну из ведущих ролей, его персонаж стал пародией на известного российского исполнителя Тимати. Далее последовали такие художественные проекты, как «Служебный роман. Наше время», «Беременный», «Дублёр», «Попугай Club». По данным на начало 2015 года, планируется выход таких фильмов и сериалов с участием Хрусталёва, как «Гороскоп на удачу», «Временно недоступен», «Помню – не помню!», «Ставка на любовь».
Дмитрий Хрусталёв с 2001 года жил с Викторией Дейчук, но спустя10 лет пара решила разойтись. В 2012 году телеведущий завёл роман с Екатериной Варнавой, которая стала известна широкой публике благодаря телевизионному шоу на «ТНТ» «Comedy Woman». Но и с ней спустя два года отношения прекратились.
