В 1989 году Джонни окончил среднюю школу и переехал в Лос-Анджелес, чтобы продолжить образование в Американской академии драматического искусства, но через две недели бросил учебу. Его актерским дебютом стала роль в рекламном ролике.
Семью годами позже Джонни пришла в голову идея испытать на себе баллончик с газом и электрошокер, снять это на видео и отправить в журнал «Большой брат». Идея сработала, вскоре Джонни пригласили на телевидение в телешоу «Чудаки», где вместе с Джеффом Тримэйном и Спайком Джонзом они ставили друг на друге достаточно опасные эксперименты. Впоследствии Джонни стал продюсером проекта. Эта «экстремальная комедия» появилась на канале «MTV» в 2001 году. Начиналось шоу с вопроса «что будет, если выстрелить из 36 калибра (9мм) себе в грудь, предварительно надев бронежилет?».
Параллельно с работой над «Чудаками», которая вылилась в несколько сезонов телесериала и фильмов, Ноксвил снимался в кино. В 2002 году он сыграл двухголового инопланетянина в ленте «Люди в черном 2» - исполнил одну из самых известных ролей в его карьере. В 2004 году Джонни снялся также в ремейке Кевина Брея «Широко шагая» с бывшей звездой реслинга Дуэйном Джонсом. В 2005 ему досталась главная роль в фильме «Придурки из Хаззарда». Позже он снялся в фильме, основанном на реальной истории известного кантри-музыканта Грэма Парсона, который умер от передозировки наркотиков, - «Долтри Кэлхун».
В 2008 году Джонни Ноксвил решил попробовать свои силы в реслинге, невзирая на астму. После боя с Великим Хали, который длился около минуты, Ноксвил получил травму шеи и отложил карьеру спортсмена. В 2013 он сыграл в комедиях «Муви 43» и «Несносный дед», а в 2014 озвучил Леонардо в фильме «Черепашки-ниндзя». Джонни Ноксвил в нарисованном виде появлялся и в мультсериале «Гриффины».
Несколько раз актер был номинирован на премию «MTV Movie Awards»: в 2003 году - за лучшую комедийную роль, лучшую драку и экранную команду в «Чудаках», в 2006 году - за лучшую экранную команду в комедии «Придурки из Хаззарда». В 2014 он выдвигался на премию за лучшую комедийную роль и самый безумный эпизод в фильме «Несносный дед».
