Родился 1 октября 1969 года в Северной Каролине в семье греческих эмигрантов. Его отец работал нефтяником, а мать была администратором в культурном центре. Полное имя – Захариус Найт. В детстве он никогда не мечтал стать актером. На последнем курсе университета молодой человек провалил экзамены, и, так и не получив диплом, перебрался жить в Нью-Йорк. Зак придумал устраивать небольшие юмористические представления у закусочной на Таймс-сквер. На его шоу обратили внимание, и молодого человека стали приглашать для выступлений в кофейнях и ресторанчиках. В 1996-м году он получил небольшую роль на телевидении, работал сценаристом в популярном телешоу «Субботним вечером в прямом эфире». Зак отметился в шоу Comedy Central Presents, а также сыграл ряд эпизодических ролей в таких фильмах, как «Король и я», «Сердцеедки», «Парень из пузыря» и «Спецагент Корки Романо».
В 2002-м году Галифианаксис запустил на телевидении собственное шоу Late World with Zach и исполнил одну из ключевых ролей в комедии «Отмороженные». Впрочем, значительной популярности он не получил и продолжал сниматься в сериалах («Вернуть из мертвых», «Рино 911») и участвовать в развлекательных шоу, среди которых можно отметить шоу «Джимми Киммел в прямом эфире». Кроме того, Зак занимался развитием музыкальной карьеры: он часто играл во время выступлений на фортепьяно, сдружился с несколькими исполнителями, снимался в их клипах и выпустил собственный сингл Come Over and Get It. К тому же периоду относятся серия комедийных интервью со звездами кино для сайта Funny or Die, главная роль в комедии «Визионеры», которая не имела широкого успеха, и второстепенные роли в лентах «В диких условиях», «Однажды в Вегасе» и «Гигантик».
Первый заметный успех пришел к Галифианакису в 2009 году, когда его пригласили на главную роль в комедии «Мальчишник в Вегасе». За свою игру он был удостоен премии MTV Movie Awards как лучший комедийный актер. Карьера Зака пошла в гору. Вскоре на экраны вышли новые фильмы с его участием: «Миссия Дарвина», «Мне бы в небо», «Бунтующая юность», «Заклятые друзья», «Ужин с придурками» и «Это очень забавная история», а в комедии «Впритык», которая увидела свет в 2010-м году, партнером Зака по съемочной площадке выступил Роберт Дауни-младший. В следующем году на экранах появился коммерчески успешный сиквел «Мальчишник 2: Из Вегаса в Бангкок». Зак принял участие в работе над лентой «Маппеты», одной из последних картин с его участием стала комедия «Грязная кампания за честные выборы», где он попробовал себя в амплуа продюсера.
В настоящее время актер проживает в доме в горах Северной Каролины. Он дает живые выступления в небольших залах и университетах, появляется в телевизионных шоу и снимается в кино: в 2013-м году ожидается выход фильма «Мальчишник в Вегасе 3». Кроме этого, Зак размышляет, не написать ли ему книгу.