Джастин Хартли родился 29 января 1977 года в городе Ноксвиль (штат Иллинойс) в многодетной семье: кроме него, родители воспитывали еще одного сына и двух дочерей. В школьные годы Джастин всерьез увлекался спортом, в частности играл в футбол, баскетбол и бейсбол. Однако с мечтой о карьере профессионального спортсмена пришлось расстаться из-за серьезной травмы. По окончании средней школы Джастин поступил в Университет Южного Иллинойса в Эдвардсвилле, а затем продолжил обучение в Иллинойском университете в Чикаго. В результате Джастин освоил две специальности – по истории и по драматическому искусству.
Дебют Хартли на телевидении состоялся в 2002 году в американской мыльной опере «Страсть», которая шла на канале «NBC» с 1999 по 2008 годы. Зрители могли видеть начинающего актера в роли Фокса Крейна четыре года (с 2002 по 2006). Главную героиню в теледраме сыграла Линдсэй Корман, впоследствии вступившая с Джастином в брак. Артисты поженились в 2004 году, и у них родилась дочь Изабелла Джастис Хартли. На сегодняшний день пара находятся в разводе.
«Тайны Смолвиля» – второй всемирно популярный сериал, где довелось сниматься Джастину Хартли. Изначально его пригласили только для нескольких эпизодов шестого и седьмого сезонов на роль миллиардера Оливера Куина и по совместительству супергероя Зеленая стрела. Но в итоге персонаж зрителям понравился, и Хартли получил постоянную работу с восьмого по десятый сезон. Зеленая стрела – не единственный супергерой, в которого довелось перевоплотиться Джастину. В 2006 году актер снялся в роли Аквамена в пилотном выпуске одноименного сериала. Правда, фильм на экраны так и не вышел, зато к нему получили доступ пользователи Интернета. В последующие годы Хартли исполнил небольшие роли в таких телевизионных проектах, как «C.S.I.: Место преступления Нью-Йорк», приключенческая комедия «Чак», комедийно-драматический сериал «Касл». Вновь сыграть ключевого персонажа ему довелось в 2012 году в многосерийной медицинской драме «Доктор Эмили Оуэнс», где его коллегой по съемочной площадке выступила актриса Мэми Гаммер.
Джастин Хартли главным образом работает на телевидении, однако время от времени появляется и в большом кино. Так, в 2005 году ему досталась эпизодическая роль в картине «Кто первый к заднице прильнет», в 2008-м он предстал в образе Тома в боевике «Красный каньон», а еще через год снялся в комедии «Весенний отрыв».
