В школьные годы Франко Неро ставил спектакли, затем в армии был руководителем самодеятельного театра. Позже Франко Неро переехал в Милан, где учился на экономическом факультете, а по ночам подрабатывал в качестве певца. Учебу ему так и не удалось окончить, однако какое-то время он работал бухгалтером, но его основным увлечением так и осталось кино. Посещая римскую киностудию «Cinecittà», Франко Неро познакомился с режиссерами Карло Лиццани, Антонио Пьетранджели и Джоном Хьюстоном, которые впоследствии предложили ему первые роли в фильмах и воодушевили его на покорение экрана.
Кинодебютом Франко Неро была картина «La ragazza in prestito» режиссера Альфредо Джанетти, снятая в 1963 году. Однако мировая известность пришла к нему после выхода в прокат в 1966 году фильма в жанре спагетти-вестерна под названием «Джанго» режиссера и сценариста Серджио Корбуччи, где он появился в роли «холодного и одинокого мстителя» героя Джанго. После этой картины Франко Неро начал получать огромное количество предложений на съемки в фильмах. В 1970-е Франко Неро сыграл множество ролей прокуроров в различных лентах спагетти-вестерна. Затем он также работал над ролями в мелодрамах, драмах, фантастических фильмах и комедиях.
В 1967 году за роль Ланселота в киноверсии одноименного мюзикла Франко Неро был удостоен премии «Золотой глобус» в номинации «Лучший молодой исполнитель». Franco Nero один из немногих западных актеров, кому было позволено участие в проектах стран посткоммунистического пространства. Большинство творческих проектов Франко Неро воплотил совместно с режиссером Энцо Дж. Кастеллари, которого Неро называл своим любимым кинорежиссером и с которым снял такие фильмы, как «Il Cittadino si ribella», «Джунгли Джанго», «Возвращение Кобры», «Keoma», а также ленту, получившую множество прекрасных отзывов критиков «La polizia incrimina, la legge assolve!».
