Родился 16 июня 1972 года в Южной Корее, в Сеуле. Его отец был пастором. Когда Джону исполнилось шесть лет, семья эмигрировала в США и обосновалась в Лос-Анджелесе. Будущий актер учился в Гербертской высшей школе искусств, закончил Калифорнийский университет (факультет английского языка и литературы). В тот период он с успехом выступал на подмостках, после получения диплома присоединился к театру Asian American. Параллельно он работал преподавателем английского языка, однако больше всего мечтал попасть в кино и потому активно посещал кастинги. На начальном этапе своей карьеры он отметился в фильмах «Плутовство», «Американский пирог», «Клевый парень», «Красота по-американски» и «Эволюция», а также в телесериалах «Великолепная семерка» и «Фелисити».
Постепенно актер становился все более известным в кинематографических кругах, много снимался в популярных картинах: «Завтра повезет больше», «Большой толстый лгун», «Крутая компания» и в последующих частях ленты «Американский пирог». Первая известность пришла к Чо в 2004-м году благодаря комедии «Гарольд и Кумар уходят в отрыв», где он исполнил одну из главных ролей. Одновременно Чо принимал участие в работе над сериалами «Дурнушка», «Секреты на кухне», «Как я встретил вашу маму», «Не в центре» и «Анатомия страсти». Его карьера успешно развивалась, он был задействован во многих проектах. В последующие годы свет увидели фильмы «Американская мечта», «Воздух, которым я дышу», «Гарольд и Кумар: Побег из Гуантанамо», «Будь моим парнем на пять минут», «Звездный путь» и «Вспомнить все». Из-за плотного графика съемок актер реже появляется на театральной сцене, тем более что немало времени у него занимает музыка: Чо – вокалист инди-рок группы Left of Zed.